液相色譜柱

液相色譜柱是高效液相色譜（HPLC）系統的核心部件，其性能直接影響到被測物質(zhì)的分離效果和測定準確性。因此，正確安裝、活化、使用和維護色譜柱對于確保檢測結果的可靠性至關(guān)重要。本文將為您提供全面的色譜柱使用與維護建議。
1.使用前的檢查和須知事項
(1) 檢查包裝盒是否完整，盒子側面有產(chǎn)品信息與自己購買(mǎi)的是否一致。
(2) 打開(kāi)包裝檢查色譜柱表面有無(wú)傷痕，柱兩端是否有塑料堵頭完全封住。
(3) 查看盒內是否有檢查報告及簽名，檢查報告中有詳細記錄，填料批號、貨號、序列號及柱性能等參數。
2.色譜柱的安裝
液相色譜柱通常會(huì )在柱身上標明方向，安裝新色譜柱時(shí)，應確保連接管路與色譜柱所標明的方向一致，避免反沖。另外，連接管路盡量使用合適的細徑管線(xiàn)，柱的兩端連接端口務(wù)必平整。若接口不匹配，可能會(huì )導致柱效下降、峰形拖尾或滲漏等問(wèn)題。

一、反相色譜柱（包括C18、C8、苯基）
使用方法：
1. 色譜柱出廠(chǎng)時(shí)都有存儲液，使用時(shí)需用互溶試劑替換。
2. 使用前用潔凈的水與乙腈沖洗系統，確保系統干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。
3. 將新色譜柱入口端接上系統，出口端先不要連接，在低流速條件下0.2mL/min用純乙腈潤洗色譜柱（色譜柱時(shí)間長(cháng)的話(huà)柱頭兩端儲存液容易干），然后2分鐘后流速升高到0.5，當溶劑均勻從柱口端流出，停泵，再將出口端連接到系統檢測器上（這樣可以避免氣泡進(jìn)入檢測系統，并且可以快速達到平衡）。備注：如果是色譜柱粒徑是3μm及以下的流速就減半，防止壓力過(guò)高。
4. 同樣先低流速開(kāi)始0.2mL/min 逐步過(guò)渡到正常流速，待基線(xiàn)平穩后（5-10倍柱體積）換成流動(dòng)相平衡，帶基線(xiàn)平衡后開(kāi)始進(jìn)樣。
5. 當流動(dòng)相有緩沖鹽或離子對試劑時(shí)需要確保柱內有充足的水，再此前用90:10（水：乙腈）充分過(guò)渡半小時(shí)以上，再換成流動(dòng)相平衡，待到平衡好后再進(jìn)樣。
保存方法：
● 不含緩沖鹽或離子對試劑項目：
使用流動(dòng)相沖洗至基線(xiàn)平穩，換成乙腈：水=2：8沖洗半小時(shí)（流速1mL/min），再換成乙腈保護30分鐘，最后色譜柱應使用堵頭將兩端密封。
● 含緩沖鹽或離子對試劑項目：
使用流動(dòng)相沖洗至基線(xiàn)平穩，換成乙腈：水=1：9沖洗1小時(shí)（流速1mL/min），再換成乙腈保護30分鐘，最后色譜柱應使用堵頭將兩端密封。注意，緩沖鹽容易析出，再使用前和結束后需要多用高比例水沖洗。
清洗再生方法：
色譜柱使用一段時(shí)間后容易出現各種問(wèn)題：
1. 柱壓升高：一般是柱頭篩板污染（固體顆?；驈姳Ａ粑铮?，可以用溶解污染物的溶劑長(cháng)時(shí)間的反向沖洗（低流速0.5mL/min）2小時(shí)以上，或者使用保護柱套；
2. 緩沖鹽正確使用：緩沖鹽溶于水卻很難溶于有機試劑，使用后應該高比例水沖洗色譜柱；
3. 強保留物滯留色譜柱：其在色譜柱中一段時(shí)間積累后會(huì )產(chǎn)生額外的保留行為，引起峰變寬，拖尾柱效下降等，同時(shí)柱壓也會(huì )不斷升高而使色譜柱損壞。建議用50℃左右甲醇：水=1：3（流速1mL/min）沖洗1小時(shí)之后換成 3：1 再沖洗1小時(shí)。
注意事項：
進(jìn)行實(shí)際樣品分析的推薦步驟：
1. 確保流動(dòng)相潔凈，每隔24-48小時(shí)就應配置流動(dòng)相，并經(jīng)常清洗流動(dòng)相溶劑瓶，以免流動(dòng)相長(cháng)菌，確保實(shí)驗室水系統工作正常；
2. 確保樣品不含顆粒雜質(zhì)，如樣品過(guò)臟或有微粒存在就不能直接進(jìn)樣，避免影響色譜柱壽命。一般需要先用濾膜過(guò)濾樣品，建議用0.22μm濾膜；
3. 確保樣品與流動(dòng)相條件相兼容，進(jìn)樣后不會(huì )發(fā)生沉淀，通常使用流動(dòng)相或比流動(dòng)相洗脫強度弱的溶液（有機比列較低的）溶解或稀釋樣品；
4. 常規分析過(guò)程中，每針間隔若干針清洗柱內可能累積的污染物，完成分析后徹底清洗色譜柱，除去緩沖鹽和污染物。

二、氨基柱和硅膠柱
使用方法：
●正相條件下使用：
1. 確保系統內不含緩沖鹽，如果有則需要先除去管路中的緩沖鹽；
2. 取下色譜柱，用二通管代替色譜柱連接好管路；
3. 用甲醇或乙腈以2.0mL/min沖洗15min，除去管路中的水；
4. 用異丙醇以2.0mL/min流速沖洗15min，除去管路中的甲醇或乙腈；
5. 取下二通管，換上色譜柱，用異丙醇以0.5mL/min沖洗色譜柱45min；
6. 換上純正己烷作流動(dòng)相過(guò)渡，以1.0mL/min沖洗色譜柱15min；（因為異丙醇的極性很強，哪怕是少量的異丙醇進(jìn)入到流動(dòng)相中都可能引起保留時(shí)間的顯著(zhù)變化）；
7. 換上分析流動(dòng)相走基線(xiàn)，通常這個(gè)過(guò)程至少需要30min，基線(xiàn)平穩后進(jìn)樣。
● 正相體系換成反相體系的方法：
1. 取下正相色譜柱，用二通管代替色譜柱連接管路，用異丙醇以2.0mL/min沖洗15min；
2. 換上純甲醇或乙腈，以2.0mL/min的流速沖洗10min。
●反相條件下使用：
氨基柱和硅膠柱出廠(chǎng)時(shí)通常保存在正己烷：異丙醇體系中，使用前先用異丙醇（0.2mL/min）過(guò)渡1晚，再用乙腈以0.5mL/min的流速沖洗3小時(shí)，后換成流動(dòng)相沖洗1小時(shí)后待基線(xiàn)平衡后開(kāi)始做樣。使用氨基柱時(shí)需要注意，由于氨基柱需要過(guò)渡飽和，一般前面幾針效果不一定能達到要求，所以多進(jìn)幾針飽和后就正常了。
保存方法：
●正相使用
1. 因為出廠(chǎng)時(shí)氨基柱和硅膠柱通常保存在正己烷：異丙醇體系中，所以正相條件下使用時(shí)可以直接用流動(dòng)相跑基線(xiàn)。
2. 由于基質(zhì)具有較強的吸附性能，為防止強保留物質(zhì)在色譜柱中的存留，每天分析任務(wù)完成后，需用異丙醇以0.5mL/min流速沖洗色譜柱60min，最后保存在異丙醇中；
3. 長(cháng)時(shí)間保存最好用異丙醇沖洗色譜柱后，用正己烷封存，然后擰緊兩端的塑料篩頭。
●反相使用
保存方法和反相柱相近，用乙腈沖洗1小時(shí)，如有緩沖鹽用乙腈水和流動(dòng)相比例接近沖洗1小時(shí)后換成乙腈沖洗40分鐘。如短期不用，乙腈保存；長(cháng)期不用時(shí)需依次用甲醇、異丙醇置換，最后用正己烷保存。
清洗再生方法：
●正相使用
第一步：異丙醇（5 倍柱體積）
第二步：50%乙腈水溶液（5 倍柱體積）
第三步：含 0.1% EDTA 的水溶液（10 倍柱體積）
第四步：0.2M 醋酸銨水溶液（20 倍柱體積）
第五步：50%乙腈水溶液（5 倍柱體積）
第六步：乙腈（10 倍柱體積，封存）
●反相使用（參照C18柱方法）
1. 柱壓升高：一般是柱頭篩板污染（固體顆?；驈姳Ａ粑铮?，可以用溶解污染物的溶劑長(cháng)時(shí)間的反向沖洗（低流速0.5mL/min）2小時(shí)以上，或者使用保護柱套。
2. 緩沖鹽正確使用：緩沖鹽溶于水卻很難溶于有機試劑，使用后應該高比例水沖洗色譜柱。
3. 強保留物滯留色譜柱：其在色譜柱中一段時(shí)間積累后會(huì )產(chǎn)生額外的保留行為，引起峰變寬，拖尾柱效下降等，同時(shí)柱壓也會(huì )不斷升高而使色譜柱損壞。建議用50℃左右甲醇：水=1：3（流速1mL/min）沖洗1小時(shí)之后換成 3：1 再沖洗1小時(shí)。
注意事項：
1、氨基柱和硅膠柱可以用于正相條件，也可以用于反相條件，但需要注意正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的，對這一點(diǎn)的忽略可能會(huì )帶給使用者一些麻煩，對于新購買(mǎi)到的柱子，首先請注意打開(kāi)分析測試說(shuō)明書(shū)，了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與將要使用的流動(dòng)相極性不同不互溶就會(huì )造成色譜柱損壞，所以切換正反向流動(dòng)相時(shí)請先用異丙醇過(guò)渡。過(guò)渡過(guò)程中注意因異丙醇粘度較大，會(huì )導致柱壓很高，適當調低流速即可。如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類(lèi)，建議在用分析流動(dòng)相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過(guò)渡，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內的析出。
2、氨基柱和硅膠柱用于正相條件，使用時(shí)需注意如下事項：
⑴ 因為出廠(chǎng)時(shí)氨基柱保存在正己烷/異丙醇＝99.5/0.5中，所以正相條件下使用時(shí)可以直接用流動(dòng)相跑基線(xiàn)；
⑵ 由于基質(zhì)具有較強的吸附性能，為防止強保留物質(zhì)在色譜柱中的存留，每天分析任務(wù)完成后，需用異丙醇以0.5mL/min流速沖洗色譜柱60min，最后保存在異丙醇中；
⑶ 長(cháng)時(shí)間保存最好用異丙醇沖洗色譜柱后，用正己烷封存，然后擰緊兩端的塑料篩頭